山丹县海藻糖
嗦吗甜的某些不寻常特性（诸如甜度很大、具有增强产品风味及掩盖不良 味觉等），使得它在食品和饮料工业上得到广泛的应用。如果在其甜味阈值浓度 以下添加人产品中，则主要起风味增强剂作用。
R.C00H + NH2Rj—R,C0NHR2 + H20 (2-2)在缩合反应中，由于未反应的氨基和竣基的电离，使得反应主要朝起始物方 向移动，因而平衡得率一般都很低。当产物肽在水溶液中不发生沉淀时，将胺和 竣酸的电离考虑在内，表观平衡常数可由下式计算：
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
图2-24中，实线和虚线分别表示了不同a值和底物浓度的组合时，G、 与pH的关系。在计算时，因P?2。值很小故用0.02计，因此水的分配对得率 的影响可以忽略不计。图中只幽了 a =丨，Z - Asp和PheOMe = 80mmol/L时的 Yaqy其他情况下Z-ASp-PheOMe在水相的得率很小。由图可知，达到最大平 衡得率时水相pH约为5,比在水溶液合成达到最大得率时的pH低。当《增大 时，则反应物的非离子形态增加，从而L增大。PheOMe和Z - Asp浓度增加都 能使L增大，但增加PheOMe浓度还提髙了合成速率因而效果更好。当pH在
在软饮料pH范围内，三氣蔗糖是所有可供选择的强力甜味剂中性质最为稳 定的一种。含有TGS的产品货架寿命长，即使经过长时间的贮藏，产品也没有 甜味损失现象。用它配制饮料时，由它而产生的限制W素很少，用它可配制出比 用其他甜味剂pH要低很多的高品质软饮料来。此外，低pH的浓缩饮料（如用 来配制碳酸饮料的矿泶浓浆）也可成功地用7氣蔗糖来生产，而生产这种浓缩 液如用其他甜味剂替代.尚未见有成功的报道。
4.评价潜在神经毒性和免疫毒性的毒理学试验
图5-4 酵母嗦吗甜提纯工艺 (DTT 为 dithiothroitol)
图5 - 5 变性嗦吗甜体外折叠至天然构塑的操作流程
阁2 - 22 在40T水/有机溶剂二相体系合成Z - Asp - PheOMe的时间-得率图 注：ffl中上方为Z - Asp - PheOMe在有机相的得牟；下方为在水相的得率。反应物为80_l/l. PhcOMc ? HCIX 80mmol/LZ-A?p、酶浓度0.053mmol/Lu參、▲、,、▲表示实聆蛄果；曲线为埂论結果。
(-)L41基因的改造
