菏泽罗汉果苷
糖精的一个最大缺陷就是其水溶液带有明显的苦后味与金属味，致使许多人 对之望而生畏。这可通过添加些其他物质来掩盖，较早使用的是甘素（dulcin), 现在使用的是葡萄糖、阿斯巴甜等。1%9年美国禁用甜蜜素之前，糖精大多与 甜蜜素混合使用，广泛应用于食品、饮料工业。该混合物至今仍在澳大利亚及欧 洲一些国家中继续应用。甜蜜素弓糖精的混合物甜味质萤很好，应用于软饮料时 简直与使用蔗糖无异。后来美国禁用甜蜜素，因此人们使用其他物质替代之，这 些物质包括：阿斯巴甜、安赛密、三氣蔗糖、结晶果糖、乳糖和多元糖醇等。在 西班牙，有一种甜度3倍于蔗糖的UNEA产品（UNEA是西班牙Wasserman Uboralories的注册产品），是由糖精、果糖和甘銪糖醇混合而成的，据说风味很 好，被当作糖来销售。
阿斯巴甜的合成原料有2种：L-天冬氨酸（L-Asp)和L-苯内‘氨酸 (L-Phe)。这2种氨基?酸分子中的功能闭较多，若不对部分基团进行保护，在 缩合反应时会出现自身酰化和交叉酰化，生成6种二肽混合物，它们分别是： a - Asp - Asp、(3 - Asp - Asp、PheOMe - PheOMe、a - Asp - PheOMe、jS 一 Asp - PheOMe和PheOMe - Asp。为减少副反应，在2种氨基酸缩合之前需对某些功能 基团进行保护，缩合后再将之脱除。
(五）酰基供体和酜基受体的比例对反应产率的影响保持/V-C3Z-L-Asp (OEt) OEt 0.5mmol 不变，改变 D-AUNH2 的谊， 得到不同比例的酰基受体D-AUNH2和酰基供体W-CBZ-L-ASP (OEt) OEt。 如图2-68所示，反应产率随宥酰基受体/酰基供体比值的增大而增加直到其比 值为1,在其比值大于1以后，酰基受体/酰基供体的比值增大不会提高反应的 产率。图2 - 68 不间酰箪受体和酰基供体摩尔比对反应产申的影响 注：丨2%的水、9%的DMS0和丨8%的MEA为辅助因子，丨5%的a -胰凝乳蛋白期.反应8h,
有别于其他C族G蛋A偶联受体的是，甜味受体为异型二聚体。一些研究 人员猜测，TIRs (特别是T1R3)很有可能就是甜味受体，并且可能像其他C族 G蛋白偶联受体一样形成同型二聚体。但是，几个月后，Li等便证明了只有异型 二聚体T1H2 -T1R3才具有甜味受体的功能。T1R3的序列有20%与mGluRs的 相同。在人们发现甜味受体的时期，mGluR8是惟一一种结构已被人们至少部分 了解了的C族G蛋白偶联受体。正是人们对mGluRlN端结构的了解，促成了首 个甜味受体同源模型的建立。类似于mGhiRl，这个模型为两条T1R3链的同型 二聚体。不久后，—个类似的模型表明，T1R3的活性位点可以容纳三个甜度极 高的小分子质量分子。
总之，世界各地的生物试验结果及许多人体食用调丧观察，结果表明：
DuBois成功地合成了甜菊醉生糖苷磺基丙酯，
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
0前，已有少数几个国家批准使用新橙皮苷二氢杳耳酮。比利时将之应用在 口香糖和饮料上，但美国食品与药物管理局认为必须继续进行下面三方面毐理试 验后才考虑是否批准使用。①依照FDA的要求重新进行大鼠毒理试验，受试动物數量要比原试验 的多；②大鼠致癌性试验；③彻底的代榭试验。
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