清涧县麦芽糖醇
四、奇异果素的生产技术
显然,具有显著a-半乳糖苷酶活力的酶制剂都是从霉菌菌丝体中获得的。 在5个具有最强的水解TCR活力的筠菌中,有4个是从W.wVwcefl中获得的,有 1个是从C. muscae中获得的。其中Af. vitmcea ATCC 20034在所有被测试的微生 物中,对TCR具有最高的水解能力。从该微生物中提取的a-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)不含转化酶的活力,目前已在甜菜糖精炼中被用来水解棉籽糖。它还 可以被固定化,此时对TCR则有更强的水解能力。
各转化体的嗦吗甜产置
(三)三肽、四肽和五肽化合物
有三个独立的NMR分析支持了 FdD,构象。事实上是Murai等人首先提出 阿斯巴甜的构象优先性。在一个详细的研究中,他们使用具有空间专一性/3- CH2端经氘化处现的天冬氨酸和苯丙氨酸制备阿斯巴甜,就可确认分子中冷- (:H2质子的存在方式。之后通过对NMK分析,可知FnDn是优先存在的构象。 Takahashi等人在一个包含阿斯巴甜与环状糊精复合物的研究中,发现不管足对 复合的还是未复合的阿斯巴甜来说,FnDD是优先存在的构象。Asso等人描述了 存在于单合镨和镝复合物中阿斯巴甜的优先构象是Dn,尽管他们将之称为 hD,。
用三氣蔗糖代昝蔗糖喂养小鼠,很少出现舌侧和邻端牙齿的损伤,在牙根表 面不会出现龋齿。这表明,三氣蔗糖没有致龋齿特性。
Jin等人通过考察更多的突变体,对上述数据进行了优化。ASp29Ala、 Asp29Lys、Asp29Asn和Glu4〗Lys这四种突变体都显示出了比天然Brazzein更为 显著的甜味特性。Ala2itw、A叩2Asn和Glnl7Ala这三种突变体则和天然的 Bmzzein —样甜。在另外8种突变体的甜味尽管明显下降,但仍然还是有味道 的,而有10种突变体,它们几乎和水一样无味,见图5-23。最近,Jiri等人又 通过把天然的Brazzein序列中一个特定Asp替换成Lys或Asu,所得产品的甜味 特性和甜度都有所增强。
注:反应条件:乳糖a28mol/L.甜叶愚钩子苷0. 14raol/L。
(四)辅助因素对产率的影响研究表明,在低熔点混合物中加入适宙:的有机溶剂能降低混合物的熔点,从 而提商酶反应的效率。图2-66所示为加入不同溶剂对反应产率的影响。其中, 加入二甲基亚砜(DMSO)和2-甲氧基乙酸乙酯(MEA>能使产率达到60%, 而辛醉和正己烷的加人使产率低于50%。这可能是因为疏水性的有机溶剂能够 改进和保持低熔点混合物的特性,从而能够促进酶反应的产率。图2 -66 不同辅助有机溶剂对反应产率的影响 注:有机溶剂都按丨5% (w/w)的比例加人,苄氧羰基-L-天冬氨酸二乙《和D-内氨酰胺分 别加人0.5mmOl, -胰凝乳蛋f*丨酶浓度为丨5% (w/w)和丨2% (w/w)的水,37?€下反庖丨Oh。表2-37同时加入DIV1SO和MEA作为低熔点混合物的辅助因子对反应产率的影响
经RNA印迹分析知tha基因在各转化体中的转录水平,比对照<4. nidulans的 芦-肌动蛋白的髙。双转化体TB2bl -44 -GD5的嗦吗甜基因转录水平最高, B2-嗦吗甜融合mRNA转录大小为1.9kb,与预计结果相同。以pcbC为启动子 的TCTh -2转化体的表达盒中该DNA片段对应的B2基因5,端只有105bP而不 是其他表达盒中的615bP,因此转录的B2-嗦吗甜mRNA较小(1.4kb)。狹线 印迹分析发现在转化体TGDTh-4、TB2bl -44、TGP -3中的嗦吗甜mRNA水平 在24~48h内最商。转化体TCTh-21 (启动子为pcbC>在整个发酵过程中的表 达水平都很低。