陈仓区糖精钠
图3-43在吡啶-氣仿溶液中蔗糖与S02C1:的进一步反应图3 - 44 4 , 6，6^-四氣半乳糖基-蔗糖衍生物的合成阁3-45 4, 6, 4\ 6夂四氣半乳糖葙-海藻糖衍生物的化学结构
(一)质粒构建
(二）二氢查耳酮的溶解度与稳定性
另有人把蕺菌血红蛋白基因(vgb)基因在毕赤酵母中的功能应用于高甜度 莫奈林所组酵母，解决毕赤酵母高密度发酵中存在的供氧不足的问题，进一步提 高髙甜度莫奈林的产萤。他们将获得的由高甜度莫奈林和vgb两个基因同时整合 的重组酵母GSU5/pPIC9M/pPlC3.5kV,以甲醇诱导，高甜度英奈林基因和vgb 基W分别以分泌和胞内的形式得到表达，且表达产物均有生物活性。VHb在胞 内的成功表达，使重组毕赤酵母高甜度莫奈林的分泌表达量提高了 20%，达
在各种致突变试验研究中，包括强致死试验、微核试验（micronucleus test)、伢髄试验、恶性转移试验、DNA结合试验等，均未发现安赛蜜有任何致 突变现象。用白鼠进行繁殖试验，表明安赛蜜对试验动物的生育能力、每窝小动 物总数、动物体苽、生长情况和死亡率等均没任何影响。
不同的Candida utilis菌株电脉冲转化的效率有较大不同。将Bgl D酶切后的 PCLRE2通过电穿孔转化至ATCC9256和ATCC9226，都能得到CYH抗性菌落， 多拷贝载体DNA也串联整合至rDNA区，但转化率都不到ATCC9950的10%。 整合至ATCC9256的pCLRE2拷贝数为6~8，整合至ATCC9226的拷贝数为 5-9,整合至ATCC9950的拷贝数为10?12。
已知TCK只有在亲水的溶剂中才能高度溶解，但在保证酶解反应能得到 必要的水的前提下，a-半乳糖苷酶却被证明在与水不互溶的有机溶剂中， 最稳定并具有最高的活力。这个矛盾，可以通过使用被含水缓冲液预饱和的 有机溶液时得以解决。研究发现，高水混溶的溶剂如二氣六环、丙酮、甲醇 和四氢呋喃等，即使使用高达30%的含水缓冲液进行预饱和，也不支持 a-半乳糖苷酶的水解反应。但在含水缓冲液预饱和的正丁醉、甲基异丁基 酮和乙酸乙酯三种溶液中，TCR的溶解度均达到50%以上。这些溶剂同时 也支持a-半乳糖苷酶的活力，只是三者对三氣蔗糖的溶解性存在很大的差 別，如表3-9所示。
由于1965年偶然发现的阿斯巴甜对热、酸不稳定，因此人们又致力于它的 改良研究。1979年，美国Pfizer公司中央研究所合成出一种新二肽甜味剂阿力 甜，用酰胺键替代阿斯巴甜分子中不稳定的酯键，使得化学稳定性得以显著提 高。阿力甜在化学结构上对阿斯巴甜作了觅要改变，其甜度也得以显著提高，约 比阿斯巴甜高10倍。由于这一不寻常的发现，于丨983年在美国申请了专利，经 过严格的毒理试验后，早在1986年就向美国FDA申请它的食品甜味剂地位，但 截至2008年为止尚未得到美国FDA批准使用。
图1 - 32 Brazzein和嗦吗甜与受体活性形态——Aoc - AB的对接的比较 (1)通过对接计算而得的两个Aoc - AB和15个Braacin分子结合的观察阳 (淡绿色部分为T1R2,深绿色郎分为T1R3, 部分为Braoein分子）
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
