得荣县甘露醇
筛选具有水解TCR活力的微生物，通常要经过如下3个步骤。①将微生物置于以棉籽糖为惟一碳源的培养基中进行富集培养。②用超声波破碎微生物细胞，并以对硝基苯-a-D-半乳糖苷为底物对微 生物进行活力测试。那些确定具有对硝基苯-a-D -半乳糖苷活性的微生物， 再进一步检测其水解棉籽糖为半乳糖和蔗糖的能力③对具有水解棉籽糖沽力的微生物再用TCR进行筛选，以确定其水解TCR 的a-半乳糖苷酶活力。 <
_法合成的缺点：①它的投料浓度与产物浓度一般都很低，生产张度低，物料处理量大，能 耗大，酶的回收困难；②酶法尚无法独立完成阿斯巴甜合成的全过程，其甲酯化仍需用化学法， 在生产过程需兼具化学法和酶法两套工艺。
4葡糖基化的研究发现，在丨3位引入2个 葡糖基后甜味特性明显改善，而在19位上引人 葡糖基则使甜味特性变差。甜菊醉双苷（结构式 如图4-6所示〉，经环糊精葡糖基转移酶催化在 13位引人葡糖基，其19位由半乳糖醋键保护，结 果发现增加1或2个葡糖基会使甜度有明显增加，
要使表达系统的表达水平较髙，则必须选择一强启动子。以Escherkhia coli lacZ为报告基因，发现C. ulULs的GAP启动子比C. utilis的PGK启动子的 效率高几倍。W此用的部分GAP基因（TDH3 )作为探针从
棉籽糖是蓆糖分子的Glc (葡萄糖）一侧再接上一个Gal (半乳糖），是一 种三糖分子。由于棉籽糖的Gal基正好位于蔗糖C-6位，充当着C-6的天然保 护基团。因此，本方法是以棉籽糖为原料，直接进行选择性氣化制得6，4\ \\ 6"-四氣棉籽糖，再经a -半乳糖苷酶水解去除Gal-6-Cl即得三氣蔗糖。
第四节其他高效甜味剂
313-10三氧蔗糖相对于蔗糖的甜度 ■ - PH2. 75 _ o - pH3.1 --A…plf7. 6
Prekash等利用催化剂还原/V-烷基化反应制备纽甜。将阿斯巴甜与
图3-10所示为20弋、pH分别在2.75、3.1和7.6条件下，相对于4% ~ 12%
图 5 - 6 放粒 pBKThb、pCKThb、pGPThb、pGDTh 和 pGD71 缩略图 注： <丨> 粗箭失所指为嗦吗甜基因转录起始点。
