宜昌市乳糖
采用电穿孔法，将质粒转至产朊假丝酵母(Candida ulUis)中。该方法较简 单并能实现Candida utUis的高效转化。对转化条件进行优化以达到最优转化率。 据研究，酵母在最优电脉冲转化率下存活率为50% -70% ,因此通过调整场强、 内阻和电容大小，使Candida utUis的存活率达10%?70%。在加了4(Vg/mL CYH的YPD平板培养基上培养C— ulUis转化体（4(Vg/mL CYH是野生塑 Candida ulilis能在YPD培养基生长的最高浓度），进行CYH抗性转化体选择。 YPD培养基组成为：2%葡萄糖、l%BaCto酵母抽提物、2%Bacto蛋白胨。由于 电脉冲导致酵母细胞膜的破裂，使细胞对渗透压更敏感，因此电脉冲处理后细胞 立即在YPD培养基上培养不形成菌落D电脉冲处理后细胞立即分散在选择性培 养基，也不能得到CYH抗性菌落，需在30弋含lmol/L山梨糖醉的YPD培养基 上预培养一段时间后，再转移至含CYH的培养基才能得到转化子。
表3 -1丨 三氯蔗糖感官品尝数据总汇
至于MNEI，也已被合成且克降于带有T71ac启动子的pET -22b +的载体 中，并于大肠杆菌BL21 (DE3)中得到表达。最近，单链莫奈林基闪MNE丨已 在大肠杆菌偏爱密码子的基础上被设计出来，从而优化了基因在大肠杆菌中的表 达。这些合成莫奈林基因被克隆于含T7启动子的PET-22 b载体。SDS-PAGE 分析结果表明，重组莫奈林的产虽髙达总可溶性蛋白的45%。
度逐渐增强，达到最大值后又逐渐减弱。在“上面”基团的位置上，随着R,的 增大，化合物[57]、[66]和[67]的甜度逐渐下降?
表5 -3 甜蛋白嗦吗甜丨和嗦吗甜n的氨基酸组成
最后制备6-甲基-3, 4-二氢-1, 2，3-嗯__4-阐-2，2 - 二氧化
(1)利用多肽缩合剂，如二环己基碳二亚胺（DCC)、羰基二咪唑（CDI)、 卡特缩合剂（BOP)等，但是这些试剂的价格非常昂责，不适合工业化生产。
