德庆县异麦芽酮糖
据估计，尽管人们对糖精的安全性问题存有疑问，但美国仍有大约70万人 经常食用，包括占总人数1/3的10岁以下的小孩。在美国，大约有60%的糖精 是用在软饮料中，有20%用在其他饮料和食品，还有20%作为餐桌甜味剂加以 使用。美国FDA统计美国消耗掉的糖精总数虽每年高达3000t,以其甜度大约是 蔗糖的300倍计算，几乎有100万t的蔗糖被糖精所替代。
经逐步稀释品尝试验测定植物嗦吗甜的甜味阈值为（2. 3 ±0.9) jig/mL,分 泌嗦吗甜及折登型嗦吗甜的甜味阈值均与植物嗦吗甜的相近。
天冬氨酰-D-丙氨酸酯化合物的结构与甜度注：括号内数值为相对于9%蔗糖液的甜度，其余的为阈值对比。美国通用食品公司除了早先登记的数种氨基醇、L-丝氨酸酯和D-丙氨酸 酯等专利外，后来又申请了很多关于甜二肽化合物的专利，如图2-76的新型烯 烃化合物[110]及其相应的烷烃化合物。在这里，烯烃化合物的反式双键可认 为是一种电子等排的酰胺（具有相同的大小与形状酰胺和经后向旋转的酰胺[111]均属于上面已讨论过的二肽化合物（表2-51和表2-42),它们的R,、 1^2和K3得以明确的优化。
该生产方法采用邻甲基苯胺先在酸性条件下与亚硝酸钠发生重氮反应，然后 通二氧化硫进行置换，用液氣进行氣化，从而得到邻甲苯磺酰氣，然后与甲苯法 相同，经过胺化、氧化、酸析和中和反应，得到糖精钠。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
使用产物沉淀法，当L - PheOMe过贵时在水溶液反应也能有很髙的得率， 其中Z - L - Asp - L - PheOMe与L - PheOMe形成不溶性沉淀。各取底物 2?10mL水中混合，并加人10mg嗜热菌蛋ft酶，起始pH6~8，在 概保持3 ~5h可得到Z-L-Asp-L-PheOMe ? L - PheOMe白色沉淀，该沉淀 得率大于95%。研究还发现，以外消旋化合物为反应底物时，只有L-PheOMe 参与缩合反应得到产物为Z-L-Asp-L-PheOMe，但D - PheOMe也能与Z-L- Asp-L-PheOMe形成沉淀。根据这些研究结果，Tosoh公司开发了生产工艺流程 (图2-20)，并在1984年完成了中试。
(二）四氣棉籽糖的酶法水解
政府管理部门基于不同的政策和个别机构的惯例，即便使用相同的临床前期 安全性资料，也会制定出不同的无毒副作用水平。其结果是，不同的机构对同一 种混合物可以制定出不同的可接受的每日摄入量。比如，在缺乏任何毒性指征的 悄况下，世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会在制定无毒副作用水平和可接 受的每日摄入最时，不认为由于食物可口性的降低和食物消耗的减少所致的体重 增长减悵是副作用，而美国食品与药物管理局（FDA)则把这些因素都考虑 进去o
DuBois成功地合成了甜菊醉生糖苷磺基丙酯，
