泰宁县山梨糖醇
(三）由G-6-a酶法合成S-6-a
(CH,),N ? SO, + C6HnNH, 60 ~7°^ >C6HnNHSOjH ? N (CH,〉3 C6HnNHS03H ? N (CHj), +NaOH ~?QH,,NHS03Na + (CH3),N + H20
在单糖专-?性果糖转移酶的作用下，G -6 - a接受从蔗糖水解中产生的一个 果糖基单元，从而专一地合成S-6-a。反应体系通常含有蔗糖、G-6-a、磷 酸盐-柠檬酸盐缓冲液（PH6.0)和果糖转移酶。研究发现，当蔗糖与G-6-a 的摩尔比为2:1时，S-6-a的得率最高，而高浓度的G-6-a底物却可有效避 免因水解产生的果糖基转移到水相而造成的合成损失。
[131]和[135]化学结构比较稳定，不易环化成二酮基哌嗪，但它们的甜 度均比阿斯巴甜小。后来，法国的研究者发现Af- (4-取代苯基甲氨酰基/硫代 甲氨酰基）-L -天冬氨酰二肽及其相应的氛基亚氨基化合物的甜度竟然比阿斯 巴甜甜100倍，令人大为吃惊。表2-60给出了部分典型例子。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
与其他氣化试剂比较，该试剂具有副反应少、三苯基膦氧化物易回收、易氣 化等优点，理论得宇?为75%左右。图3-23所示为其反应机理，反应介质应对 氣化试剂稳定性好、.沸点较好（>951)以使反应在适宜的时间内完成，但不 宜高于1201，因为此条件易造成炭化。
阁3-8 lOOt时三氣蔗糖水溶液 (0.1%)在不同pH环境中的稳定图3-9用[^Cl]标记的三氣蔗糖水溶液在 PH3、40T：时的稳定性表3 -1所示为三氣蔗糖物料衡算结果，它是通过比较试样中残余TGS数量 及已降解成酸水解产物1，6-二氣果糖（1，6-DGF)和4-氯代半乳糖（4- CG)的TGS数虽，并由液体闪烁计数检测器分析而得。定量回收率是通过测定 TGS及2种分解产物数里得到的，它表明在该条件下三氣蔗糖降解成其组成单糖 衍生物是它的惟一降解途径。表3 -1 40又’三氣蔗糖水溶液的稳定
1980年，Sweatman和Renwick用经过系统安排其生活方式的白鼠做试验， 观察糖精摄人后在机体血液、尿和各组织中的分布。他们让白鼠摄入含 0% ~10%糖楮的饲料维持22d，跟踪在24h内血液中糖楮浓度的变化情况及糖 精在各机体组织中的分布情况。研究发现在肺、肝、肾、脾和肾上腺中的浓度较 髙，肠道、肾、泌尿膀胱中的浓度较机体整体平均浓度髙，膀胱与尿中糖精浓度 比值为1:100。据此，作者认为糖精通过尿向膀胱的扩散渗透率有限。这一结论 与他们的早期结论一致，但与Co丨burn所报道的正好相反，因Colburn认为白鼠 膀胱对糖精的吸收率很明显。这一差异的部分原因在于两个试验对动物膀胱的操 作控制情况不同，Kemvick和Sweatman所采纳的方法是用镊子或轻轻触摸膀胱以 排出尿，这样造成尿的表观渗透率增大。
