上街区AK糖
对嗦吗甜基因进行体外突变，或插人合成低聚核苷酸罝换DNA序列或在体 外诱变，得到大量突变基因。这些突变基因克隆至酵母，使其分泌嗦吗甜。大多 数这些带突变基因的质粒能使酵母分泌变异嗦吗甜，但也有些质粒中没有插人使 嗦吗甜分泌的DNA序列，也没有能使嗦吗甜发生折番复性的突变。
构建的pRMll和pUMll中包含细菌质粒序列，因此经Bgl II酶切去除细菌 序列实现线性化后将促进载体在目标部位通过单交换取组（single crossover recombination)进行的整合，分别以质粒pCLRM216和pKMl 1所含的rDNA片段 和质粒pUMl 1所含URA3基因片段作为同源重组整合的目标序列。
鉴评人员对几个嗦吗甜突变样品，与植物嗦吗甜、蔗糖、阿斯巴甜的甜味强 度及口感特征的评估比较，发现有一个嗦吗甜突变体仍具有很髙的甜度，相比于 植物嗦吗甜，它与蔗糖的时间-甜度曲线更接近。另外几种突变体的结果也较 好。这表明对嗦吗甜基因进行改造，可以得到不同甜味特性的嗦吗甜类似物。
在蔗糖的化学改性以寻求新的甜味衍生物过程中，4，1#，6'-三氣-4, \\ 6、三脱氧半乳蔗糖（4, r, a^tn-chloro-galactosucrose, TGS，简称“三氣廉 糖”）是其中已产业化的一种甜度最大、味觉特性最好的衍生物，英国Tate &? Lyle公司的商品名为Sucrabse (又称“蔗糖素”>。由于其品质优乘，安全可靠， 美国FDA于1998年3月21日批准使用，同时还得到全世界如加拿大、澳大利 亚、俄罗斯和中国等很多国家的批准。
第一节糖 精
从图中可以看出，位于果糖基单元的i.'-ch2 (x4s)和r-ci (X8S)这两 个毗邻的疏水部位和受体蛋白质的X丨（4是指从蛋A质N末端数过来的甜味蛋 白受体中与甜味分子疏水基团X结合的氨基酸残基侧链的序数，下同）和W氨 基酸残基侧链分别相互作用，三氣蔗糖葡糖基单元上轴向的4-Cl (X5S)则和 <氨基酸残基侧链相互作用。而且，果糖基单元上的< -0H以质子供体 (AH4s)的形式与）C氨基酸残基侧链形成额外氢键。该氢键C0CT……H0 (0. 28nm, 160°)的形成，要求呋喃环的假旋转和分子内糖苷键C, - 0 - Cr的轻 微转动，这可能得到在6-0H和6'-C1间所形成的弱分子内氢键的帮助。位于 果糖基单元的&-C1因此占据了可与受体活性部位相互作用的位罝，从而有利 于甜度的增强。
比较二种试验操作，后一种操作虽然可省去制冷设备，但其得率较低，也较 难提纯。更重要的是，由于糖苷键在酸性溶液中易断裂，温度越高，断裂越易发 生。综合考虑，采用第一种方法为好，既安全又高效。
(二）质粒构建
2.计算机模拟识别计算机模拟技术进一步证实了以上观点的正确性，并肯定了果糖基部分在充当 蔗糖生甜团X功能部位的重要性。模拟结果表明，蔗糖分子中确实存在上述两对 AH/B双官能实体，Bdr-OH/2-O和y-OH/2-O，前者连接三个Kiei?疏水部位 X于r-H、6-H和后者连接两个这样的中心于厂-H、6-H,而且，这些疏 水部位X与AH、B基团组成甜昧三角形生甜团时的构象均与预期的顺时针方向一致。
三脱氧-半乳糖基-蔗糖（Sucralose,参见本章第一节）是最甜的蔗糖衍生 物，比蔗糖甜600?650倍。由于Sucralose具有甜味纯正、安全无毒等特性，对 抗酸水解的稳定性比蔗糖大60倍，因此英国Tate & Tyle公司选择了它作为一种 髙效新型的甜味剂加以开发，现已实现产业化规模。
