纳雍县低聚半乳糖
derived,Charles River CD白鼠）；③最敏感的性别——雄性；④最敏感的暴露 期——第二代。
物钾盐。将上步残余物用等质量的甲醇溶解，在0弋搅拌下，用20%的氢氧化钾
在反应混合物中加人一定虽：的水，不仅能降低低熔点混合物的熔点，同时 还能够使酶溶解在其中。图2 -65反映了混合物中含水萤对反应产率的影响， 反应产率随含水萤的增加而增加。在含水最较低时，由于不能很好形成低熔点 混合物而影响了反应的进行。当含水萤超过12%后，反应产率的上升幅度趋 于平缓含水■(—)/%m 2 -65混合物含水*对产率的影响 注：其中苄氣羰基-L-天冬氨酸二乙期和D-丙氨酰胺分别加入0.5mmo丨，^-狹凝乳蛋卩丨酶浓 度为丨5% 37*C下反应8h。
CH2—C CH=C
从Fischer■提出的甜二肽分子模型中，可清楚地看出甜味在立体化学上的要 求。然而，等价但更紧密的结构01仍有意义。Goodman和Gilon提出一个相似的 典型例子是L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸（及D-丙氨酸）酯。
阿力甜（Alitame)是由L-天冬氨酰、D -丙氨酸和C -端酰胺3部分组成， 它是用酰胺键替代阿斯巴甜分子中不稳定的酯键，使得化学稳定性得以显著提 高。用阿力甜增甜的部分酸性饮料，经长时间f*：存后会出现一些不配伍现象，感 官分析发现有明显的硫味。液体产品中可与阿力甜反应产生异味的物质，多数是 H202或NaHSO;等。截止2008年，阿力甜尚未被美国FDA认可，全世界只有中 国、澳大利亚和墨西哥等少数几个国家批准使用。1996年，JECFA确定的阿力 甜AD丨值为1 mg/kg。
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
图5-21 MCL的三维分子模型 Cy8*Hi?残基都以棍状阁表示。在图中，C表示CyB，H表示HU。
1965年12月，美国Schlatter在合成供生物分析用的四肽化合物促朽液激素 时，阿斯巴甜（Aspartame, A PM)这个中间产物溅到Schlatter的手上，因他知道 这种氨基酸混合物无毐，因此就不忙于立即洗手。后来当他为取一张称1：纸而舔 了一下那个手指时，顿时感到这种二肽酯具有糖一样的甜味。阿斯巴甜就这样被
通过比较发现，仙茅蛋白和其他6种甜蛋白和变味蛋白间的序列或结构没 有相似性，但它和雪花莲的植物凝血素（GNA)的41%完全一致，65%同源 (homology) 0 GNA是连接有甘露糖的植物凝血素。Hestei?等认为基于GNA和
